La chlorophylle est un pigment vert présent dans les plantes supérieures et tous les autres organismes photosynthétiques. La chlorophylle A et la chlorophylle B sont solubles dans l'éthanol, l'éther et l'acétone et d'autres solvants, insolubles dans l'eau et l'éther de pétrole, par conséquent, peuvent utiliser des solvants polaires tels que l'acétone, le méthanol, l'éthanol, l'acétate d'éthyle, etc. pour extraire la chlorophylle.
Processus d'extraction de la chlorophylle :
L'extraction de la chlorophylle est préparée dans une chambre semi-obscure à 25 degrés C. Les étapes d'extraction sont les suivantes :
(1) Prenez 1000 grammes de feuilles vertes fraîches et écrasez-les dans un Wechsler.
(2) Mettez les 1000 grammes de feuilles vertes écrasées dans de l'acétone avec une petite quantité de carbonate de calcium (température 20 degrés) pour l'extraction, jusqu'à ce que les fragments de feuilles soient incolores après filtrage et nettoyage.
(3) Mettez l'extrait d'acétone filtré dans un entonnoir contenant 1 litre d'éther de pétrole et 100 ml d'acétone, puis tournez doucement tout en ajoutant de l'eau distillée jusqu'à stratification. La plupart de l'acétone et des impuretés solubles dans l'eau dans la couche d'eau sont rejetées, ne laissant que la solution d'éther de pétrole.
(4) Une fois la solution d'éther de pétrole purifiée à nouveau avec de l'eau distillée, elle est nettoyée plus de 5 fois avec 200 ml de solution de méthanol à 80 % contenant de l'éther de pétrole et 0,01 g d'acide oxalique, et enfin une suspension jaune-vert est obtenue. .
(5) Sécher la suspension avec du sulfate de sodium anhydre et l'infiltrer dans une colonne constituée de poudre de saccharose de 3 cm d'épaisseur. Nettoyez ensuite les pigments précipités pour éliminer les caroténoïdes et les faire contenir uniquement de la chlorophylle naturelle.
(6) La colonne de saccharose contenant de la chlorophylle naturelle est divisée en deux couches, la couche verte a une couche de 4-10 mm de chlorophylle B, l'autre couche bleue est une couche de 2-6 mm de chlorophylle A.
(7) La partie située au milieu de la couche bleue (environ la moitié de la couche bleue) est mise dans l'éther, la suspension est filtrée et extraite, nettoyée à l'eau distillée, séchée avec du sulfate de sodium et filtrée avec des ustensiles pour obtenir de la chlorophylle UN.
(8) Retirez la partie médiane de la couche verte en (6) et placez-la rapidement dans l'éther pour la filtration et le lavage afin de préparer une solution d'éther de chlorophylle B.
Comment séparer lors de l'extraction ?
La chromatographie est une méthode importante pour la séparation, la purification et l'identification des composés organiques, en particulier dans la microanalyse est largement utilisée. Les pigments présents dans les fruits et légumes comprennent principalement le carotène liposoluble, la lutéine, la chlorophylle et les anthocyanes hydrosolubles. Dans les expériences d'extraction, nous pouvons utiliser le principe de la filtration des anthocyanes solubles dans l'eau à miscibilité similaire, qui à son tour peut utiliser la chromatographie en couche mince, la chromatographie sur colonne, la chromatographie liquide à haute performance (HPLC) pour séparer le bêta-carotène, la lutéine et la chlorophylle, affaiblie en raison de la polarité des trois types de pigments à leur tour, peut être choisie de manière appropriée un solvant organique unique ou un rapport différent de solvant mixte comme agent d'expansion et agent d'élution. Les conditions de séparation optimales ont été déterminées.
